绿针假单胞菌YL-1抗细菌活性相关基因的克隆和分析

作     者：刘邮洲 Shi-En Lu Sonya M.Baird 乔俊卿 杜艳 LIU You-zhou;SHI-En Lu;SONYA M.Baird;QIAO Jun-qing;DU Yan

作者机构：江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014 美国密西西比州立大学植物病理系密西西比州39759 

出 版 物：《植物病理学报》 (Acta Phytopathologica Sinica)

年 卷 期：2015年第45卷第3期

页      面：307-316页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31201555) 江苏省自主创新基金项目[CX(13)5027] 

主　　题：绿针假单胞菌YL-1 突变株 抗细菌活性 质粒拯救 克隆 

摘      要：绿针假单胞菌YL-1对植物多种重要病原细菌和病原真菌有较强的抑制作用。采用转座子插入突变技术电转化绿针假单胞菌YL-1,构建随机插入突变体库。通过平板抑菌试验从突变体库中筛选对3种病原细菌荚壳伯克霍尔德菌Burkholderia glumae、解淀粉欧文氏菌Erwinia amylovora和胡萝卜果胶杆菌Pectobacterium carotovora抑菌效果显著下降的突变体,并采用PCR和Southern Blot验证转座子是否成功插入到YL-1染色体基因组上。利用质粒拯救技术克隆转座子插入位点基因、测序和生物信息学分析。结果表明:本研究成功构建了绿针假单胞菌YL-1随机插入突变体库,筛选出7株对3种病原细菌抑制效果明显下降的突变体,但其对立枯丝核菌的抑制效果与野生型菌株YL-1相同;PCR和Southern Blot试验结果表明绿针假单胞菌YL-1的7株突变体均是单拷贝;克隆到7个突变体插入位点的基因序列并测序,生物信息学分析结果表明其中6个突变位点是嗜铁素合成基因簇,1个突变位点是蛋白分泌基因sec Y。