抗肝癌单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40的构建及其导向作用的实验研究

作     者：胡川闽 郭建秀 李鹏 陈安 刘彦仿 HU Chuan-min;GUO Jian-xiu;LI Peng;CHEN An;LIU Yan-fang

作者机构：第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室重庆400038 第四军医大学病理学教研室西安710032 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2005年第27卷第22期

页      面：2209-2212页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：重庆市科委自然科学基金资助重点项目(2004BA5017)~~ 

主　　题：肝细胞肝癌 单链抗体 免疫毒素 克隆 表达 

摘      要：目的构建单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40并探讨其导向细胞毒作用。方法采用亚克隆技术,首先将HAb25(scFv)与绿脓杆菌外毒素基因突变子PE40,在p ly5载体上构建HAb25(scFv)-PE40单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pBV220原核表达载体中,转化DH5α宿主菌,温度诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法;间接免疫荧光染色鉴定HAb25(scFv)-PE40与肝癌细胞结合的特异性;体外导向细胞毒实验明确其是否具有选择性靶细胞杀伤活性。结果限制性酶切图谱和序列分析证实在p ly5载体上成功地构建了HAb25(scFv)-PE40单链免疫毒素基因;该单链免疫毒素基因在pBV220载体中获得高效表达,其表达量占菌体总蛋白的43.3%;纯化后的HAb25(scFv)-PE40间接免疫荧光染色显示具有与亲本抗体HAb25相同的抗原结合特性;导向细胞毒实验结果显示HAb25(scFv)-PE40具有明确的选择性靶细胞杀伤活性。结论已成功构建和高效表达了单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40,该免疫毒素有选择性地杀伤靶肝细胞的生物活性(P0.001),为其进一步的基础和临床应用研究奠定了基础。