重组赖氨酸内肽酶构建表达及活性方法研究

作     者：马妍 付志成 范开 MA Yan;FU Zhi-cheng;FAN Kai

作者机构：重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054 富进生物医药有限公司重庆400041 

出 版 物：《重庆理工大学学报（自然科学）》 (Journal of Chongqing University of Technology：Natural Science)

年 卷 期：2015年第29卷第4期

页      面：53-59,106页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

主　　题：基因重组 表达 胰岛素原 活性 

摘      要：设计了重组赖氨酸内肽酶蛋白氨基酸序列,根据***酵母密码子偏爱性原则设计c DNA序列,其中TGA和TAA为两个终止密码子序列,并在序列5’端和3’端分别设计Xho I(CTCGAG)和Not I(GCGGCCGC)限制性酶切位点,将其重组到原核表达质粒p MD19-T中,得到p MD19-T-Lys-C,并在毕赤酵母中获得表达。应用SDS-PAGE电泳及免疫斑点法检测其表达,RP-HPLC分析重组赖氨酸内肽酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的氨基酸残基,证明该重组的赖氨酸内肽酶可替代Lysyl Endopeptidase应用于胰岛素的制备工艺中。