重组人白介素1受体Ⅰ型细胞外基因在毕赤酵母的表达

作     者：吕渭辉 庄俊华 陈炜烨 张战锋 黄宪章 L(U) Wei-hui;ZHUANG Jun-hua;CHEN Wei-ye;ZHANG Zhan-feng;HUANG Xian-zhang

作者机构：广州中医药大学DME中心广东广州510405 广州中医药大学第二临床医学院广东广州510120 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2010年第30卷第8期

页      面：1841-1843页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：广东省科技计划项目(83027) 

主　　题：白介素1受体I型 重组质粒 毕赤酵母 

摘      要：目的构建白介素1受体Ⅰ型细胞外基因(可溶性白介素1受体Ⅰ型,sIL-1RⅠ)的pPICZαA-sIL-1RⅠ重组表达载体,利用毕赤酵母表达技术表达sIL-1RⅠ蛋白。方法采用RT-PCR技术扩增基因sIL-1RⅠ,经酶切连接构建重组质粒pPICZαA-sIL-1RⅠ,转化***13;阳性克隆经测序成功后,把pPICZαA-sIL-1RⅠ重组质粒电转入毕赤酵母菌株GS115,PCR对阳性克隆进行鉴定,以及对GS115转化子表型筛选。确定表型后,对重组菌株进行甲醇诱导蛋白表达。提取菌体蛋白和上清液进行Westernblotting检测以鉴定蛋白表达属于菌内表达还是分泌表达。结果 pPICZαA-sIL-1RⅠ重组质粒构建成功;pPICZαA-sIL-1RⅠ成功电转入酵母菌GS115;转化子表型筛选结果为甲醇诱导缓慢型Muts;对培养上清和菌体蛋白进行Westernblotting检测结果:上清没有检测到蛋白,在菌体内检测到蛋白。结论成功运用毕赤酵母表达体系表达sIL-1RⅠ蛋白,为sIL-1RⅠ的研究和应用提供实验基础。