人DNA聚合酶δ结合蛋白PDIP38的克隆、表达和纯化

作     者：翁云 Rakhee Gupte Marietta Y.W.T.Lee 梁念慈 

作者机构：中山大学中山医学院生化教研室广东广州510080 纽约医学院生物化学与分子生物学系美国纽约10595 广东医学院生化教研室广东湛江524023 

出 版 物：《中山大学学报（医学科学版）》 (Journal of Sun Yat-Sen University:Medical Sciences)

年 卷 期：2004年第25卷第1期

页      面：29-33页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：美国National Institutes of Health Grant NIHgrant(No:41-04-96) 广东省高等学校重点学科(C类)基金资助项目(1999-2002) 

主　　题：PDIP38 谷胱甘肽s转移酶融合蛋白 克隆 纯化 

摘      要：[目的]克隆表达和纯化野生型及3种缺失突变型人PDIP38谷胱甘肽S转移酶(glutathion S trans-ferase,GST)融合蛋白。[方法]采用常规PCR扩增法得到野生型及3种缺失突变型人PDIP38的cDNA;4种cD-NA与GST融合载体pGEX-4T-1重组并转化大肠杆菌DH5α;采用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定插入的DNA序列;采用谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白。[结果]野生型和3种缺失突变型人PDIP38 GST融合蛋白在DH5α中高效表达;经谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱一步纯化后,4种蛋白的纯度均达到85％以上。[结论]pGEX-4T-1 GST蛋白融合载体可高效表达人PDIP38蛋白;用谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱一步纯化法可简单、快速地得到高纯度的蛋白。