CD80/IgG融合基因重组表达载体的构建及在CHO细胞中功能性表达的研究

作     者：何伟 张敏 冯献启 刘芳 邹萍 HE Wei;ZHANG Min;FENG Xian-qi;LIU Fang;ZOU Ping

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2005年第25卷第9期

页      面：747-751页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30240022) 

主　　题：融合基因 免疫逃逸 免疫治疗 转染CHO细胞 重组表达载体 功能性表达 表达的研究 融合基因 基因真核表达载体 ELISA检测 白血病细胞 分子克隆技术 

摘      要：目的构建CD80/IgG真核表达载体,使其在中国地仓鼠卵巢细胞(Chinesehamsterovum,CHO)中功能性表达,寻找消除白血病细胞免疫逃逸的有效方法。方法采用定向分子克隆技术将小鼠CD80胞外段和IgG1Fc段的cDNA串联至真核表达载体pcDNA3.0中,运用脂质体将所得的重组子转染CHO细胞,经免疫印迹、斑点ELISA检测其表达,免疫亲和层析法纯化其表达产物,用流式细胞术、MTT比色法及ELISA在体外检测该产物的生物学活性。结果两段目的基因按预期设想克隆入空载体中并得到了表达,亲和层析纯化获得了高纯度目的蛋白,该蛋白能够将白血病细胞表面CD80分子密度提高5倍,并可显著增强同种异体小鼠淋巴细胞的增殖、对白血病细胞的杀伤以及IL-2的分泌。结论成功构建了融合基因真核表达载体,其表达产物在体外具有相应的生物学功能,有希望成为消除白血病细胞免疫逃逸的有力工具。