利用正交设计优化水曲柳ISSR-PCR反应体系

作     者：谢运海 夏德安 姜静 林萍 Xie Yunhai;Xia De'an;Jiang Jing;Lin ping

作者机构：东北林业大学林学院哈尔滨150040 黑龙江省林业科学院哈尔滨150040 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2005年第3卷第3期

页      面：445-450页

学科分类：0907[农学-林学] 08[工学] 0829[工学-林业工程] 09[农学] 

基　　金：国家十五攻关课题 北方主要珍贵阔叶用材树种优良品种选育及培育技术——子课题水曲柳良种选育技术(2002BA515B0502)基金项目资助 

主　　题：PCR反应体系 水曲柳 设计优化 ISSR-PCR ISSR标记技术 MINITAB Mg^2+ Taq酶 最佳反应体系 模板DNA 标准化程序 正交设计 dNTP 优化试验 统计软件 退火温度 优化系统 地理变异 水平 mol 引物 果用 

摘      要：利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因素的最佳水平,建立水曲柳ISSR-PCR反应的最佳体系(20滋l)为:Taq酶1.0U,Mg2+2.0mmol/L,模板DNA50￣200ng,dNTP0.15mmol/L,引物0.3滋mol/L。最后,对水曲柳ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为58.3℃。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术,研究水曲柳的地理变异提供一个标准化程序。