一种斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的制备方法

作     者：陈将飞 陈元红 靳大庆 CHEN Jiangfei;CHEN Yuanhong;JIN Daqing

作者机构：浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州医学院水域科学与环境生态研究所浙江温州325035 国家遗传工程实验室复旦大学生命科学院上海200433 

出 版 物：《温州医学院学报》 (Journal of Wenzhou Medical College)

年 卷 期：2012年第42卷第5期

页      面：453-457页

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：浙江省大学生科技创新项目(2010R413049) 

主　　题：To12转座子 斑马鱼 multi-site gateway技术 肝脏特异性表达 

摘      要：目的:建立一套快速制备斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的新方法。方法:首先利用multi-site gateway技术将斑马鱼肝脏脂肪酸结合蛋白(fabp10a)启动子片段与入门载体进行BP重组获得启动子的入门克隆pENTR-fabp10a,然后将目的基因克隆到载体pME-MCS中形成入门克隆pENTR-interest,最后通过multi-site gateway技术将pENTR-fabp10a、pENTR-interest和含有EGFP标记基因的p3E-IRES-EGFPpA质粒在Tol2转座载体pDestTol2pA2上进行定向重组即可获得斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体pTol2-fabp10a-interest-IRES-EGFP。本研究采用红色荧光蛋白基因DsRed2作为目的基因,用上述方法构建了转基因载体pTol2-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP,并将其注射至单细胞期斑马鱼胚胎中进行表达分析。结果:转基因载体pTol2-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP在斑马鱼肝脏组织中能实现红色和绿色荧光蛋白同步特异表达。结论:利用Tol2转座系统以及multi-site gateway技术构建斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体是一套行之有效的方法。