丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶特异性结合肽的筛选和鉴定

作     者：杜桂鑫 侯利华 陈万荣 张永国 王海涛 

作者机构：军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2002年第42卷第3期

页      面：298-304页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金重点项目资助 ( 396 30 0 2 0 )~~ 

主　　题：丙型肝炎病毒 丝氨酸蛋白酶 特异性结合肽 筛选 鉴定 噬菌体展示 肽库 

摘      要：丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶在病毒复制和包装中的重要作用使其成为特异性抗病毒药物研究的首选靶标。根据丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,用柔性连接子连接NS3丝氨酸蛋白酶结构域和NS4A的核心序列 ,构建成单链丝氨酸蛋白酶基因并且在大肠杆菌中获得高水平的可溶性表达 ,纯化后的目的蛋白能够切割重组蛋白底物NS5ab。随后 ,以单链丝氨酸蛋白酶为靶分子对噬菌体展示的随机十二肽库进行了三轮淘筛 ,挑选的 44个克隆中有 3 7个克隆能够特异性地结合丝氨酸蛋白酶 ,并且这种结合作用为竞争性ELISA试验结果所支持。对 1 3个克隆进行序列测定 ,得到 6种序列 ,它们在氨基酸组成上存在明显偏性 ,富含组氨酸和色氨酸 ,缺乏酸性氨基酸 ;