RNA干扰技术阻抑survivin基因表达对子宫颈癌细胞放射和化疗敏感性的影响

作     者：宋晖 辛晓燕 肖锋 王德堂 韩星 郭会玲 SONG Hui;XIN Xiao-yan;XIAO Feng;WANG De-tang;HAN Xing;GUO Hui-ling

作者机构：第四军医大学西京医院妇产科西安710032 第四军医大学西京医院 放射治疗科西安710032 

出 版 物：《中华妇产科杂志》 (Chinese Journal of Obstetrics and Gynecology)

年 卷 期：2006年第41卷第8期

页      面：554-558页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：RNA干扰 微管相关蛋白质类 宫颈肿瘤 细胞凋亡 辐射耐受性 顺铂 

摘      要：目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术阻抑survivin基因的表达,对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性和化疗敏感性的影响。方法通过脂质体介导,将含survivin基因小分子干扰RNA的重组真核表达质粒pSilencer2．1-s2、阴性对照质粒pSilencer2．1-NC和空载质粒pSilencer2．1-U6 neo转染宫颈癌细胞系HeLa,获得HeLa-s2、HeLa-NC和HeLa-U6 neo细胞,同时设未转染的HeLa细胞为阴性对照。RT-PCR技术、蛋白印迹法分别检测survivin mRNA和蛋白的表达水平,并计算survivin mRNA和蛋白表达抑制率;激酶活性检测法测定波长在405 nm处的吸光度(A405)值,表示半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;平板克隆形成实验观察细胞的放射敏感性变化,以克隆形成率表示;四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活率并计算顺铂的50％抑制浓度(IC50)。结果与HeLa-NC、HeLa-U6 neo及未转染的HeLa细胞比较,HeLa-s2细胞survivin mRNA和蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA和蛋白表达抑制率分别为(62．8±0．3)％和(60．1±0．5)％。HeLa-s2细胞的A405值为1．261±0．043,未转染的HeLa细胞的A405值为0．314±0．012,两者比较,差异有统计学意义(P0．05)。HeLa-s2与未转染的HeLa细胞相比,细胞凋亡率明显升高(P0．05),分别为(29．23±1．41)％和(2．74±0．32)％。不同照射剂量下,HeLa-s2与未转染的HeLa细胞分别比较,克隆形成率均明显降低(P0．05)。在同一顺铂浓度下,HeLa-s2与未转染的HeLa细胞比较,细胞存活率显著降低(P0．05),HeLa-s2细胞对顺铂的IC50值较未转染的HeLa细胞下降显著(P 0．05),分别为(0．873±0．021)和(9．212±0．033)μg／ml。结论利用RNAi技术可阻抑HeLa细胞中survivin基因的表达,增强caspase-3活性,诱导细胞凋亡,显著提高细胞的放射敏感性和对顺铂的化疗敏感性。