人呼吸道粘液分泌体外实验方法的建立

作     者：何韶衡 

作者机构：汕头大学医学院变态反应学与炎症学研究所广东汕头515031 

出 版 物：《中国呼吸与危重监护杂志》 (Chinese Journal of Respiratory and Critical Care Medicine)

年 卷 期：2003年第2卷第6期

页      面：351-354页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助 ( 30 1 40 0 2 3) 

主　　题：呼吸道粘液分泌 体外实验 支气管 基础粘蛋白分泌量 激发粘蛋白分泌量 二花葙豆凝集素 实验方法 

摘      要：目的 建立研究人类呼吸道粘液分泌的体外实验方法。方法 直径小于 3mm的小支气管组织 (HSBT)剪碎后被均匀地放入 2 4孔培养板中。分别记录基础粘蛋白分泌量 (BM)和激发粘蛋白分泌量 (SM ) ,SM用超过BM的百分率表示。在含 50nmol/L视黄酸的BEGM与DMEM (1∶1)混合液中进行支气管粘膜上皮的原位培养 ,在带半透膜的插入培养板中培养正常人支气管上皮细胞 (NHBE)。MUC5AC粘蛋白ELISA以其多克隆抗体为一抗 ,绵羊抗兔IgG为二抗 ,邻苯二甲酰胺显色。酶连二花豆凝集素 (DBA)试验 (ELDBAA)以DBA铺盘以便与粘蛋白结合 ,用过氧化物酶标记的DBA识别被捕捉的粘蛋白。结果 MUC5ACELISA的敏感性为 10ng/ml ,而ELDBAA为 3 0ng/ml。经过 3h培养 ,HSBT的基础MUC5AC和DBA粘蛋白分泌量分别为 11和 19ng/mg组织。原位培养的支气管粘膜上皮细胞 3h积聚的粘蛋白分泌量分别为MUC5AC粘蛋白 793～ 1868ng/孔和DBA粘蛋白 2 90～ 2 675ng/孔。NHBE细胞在气液界面形成后的第 6d ,3h积聚的基础DBA粘蛋白分泌量为 2 2ng/孔。