金属β内酰胺酶基因bla_(NDM)重组酶聚合酶扩增方法的建立

作     者：屠博文 赵莹 黎俊宏 杜强 毛旭建 唐宏兵 吉俊敏 韩晓冬 王昆 Tu Bowen;Zhao Ying;Li Junhong;Du Qiang;Mao Xujian;Tang Hongbing;Ji Junmin;Han Xiaodong;Wang Kun

作者机构：常州市疾病预防控制中心检测中心常州213022 

出 版 物：《卫生研究》 (Journal of Hygiene Research)

年 卷 期：2019年第48卷第1期

页      面：99-103,108页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：江苏省自然科学基金青年基金(No.BK20150250) 江苏省预防医学会科研课题(No.Y2015016) 常州市科技项目(No.CE20165042) 

主　　题：重组酶聚合酶扩增 金属β内酰胺酶基因blaNDM 现场检测技术 广泛耐药菌 

摘      要：目的建立一种基于重组酶聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)扩增方法金属β内酰胺酶基因bla_(NDM)的快速检测方法,为广泛耐药菌基因类型的确定提供技术支持。方法遵照重组酶聚合酶扩增引物和探针设计原则,以bla_(NDM)基因特异性序列为靶基因,设计相应的RPA扩增引物和探针。取梯度稀释已知拷贝数的DNA模板和致病菌核酸样品进行各扩增体系的RPA扩增实验,分析扩增体系的敏感性、特异性和重复性特征以便筛选和评价bla_(NDM)基因的RPA扩增体系。结果 3组扩增体系的引物和探针能够有效的扩增靶基因,检出限达到2×10~2copys/反应,与其他细菌样品无非特异性扩增反应,能够在2～7 min内实现靶基因有效扩增。结论建立了金属β内酰胺酶基因bla_(NDM)的重组酶聚合酶扩增体系,该反应迅速,检出限较低,具有较高的特异性,适用于耐药菌的现场检测。