大肠杆菌脂多糖体外诱导小鼠血小板凋亡的研究

作     者：吉祥 姚芳超 王兵 王勇强 曹书华 王玉亮 Ji Xiang;Yao Fangchao;Wang Bing;Wang Yongqiang;Cao Shuhua;Wang Yuliang

作者机构：天津医科大学一中心临床学院300192 天津市第一中心医院急救医学研究所300192 卫生部危重病急救医学重点实验室300384 

出 版 物：《中华危重病急救医学》 (Chinese Critical Care Medicine)

年 卷 期：2015年第27卷第8期

页      面：677-681页

核心收录：

学科分类：100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 1011[医学-护理学（可授医学、理学学位）] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：天津市卫计委攻关课题(14KG101) 国家临床重点专科建设项目(2011-873) 

主　　题：脂多糖 脓毒症 血小板 凋亡 血小板减少症 

摘      要：目的：观察大肠杆菌脂多糖（LPS）是否可在体外诱导小鼠血小板凋亡的发生。方法制备洗涤血小板悬液，调整血小板终浓度至3x108/mL。根据刺激剂不同分为对照组〔无钙台式缓冲液（TB）〕、凝血酶处理组（终浓度1 U/mL，无钙TB制备）和不同浓度LPS处理组（终浓度1、10、100μg/mL，无钙TB制备）。各组加入相应刺激剂后室温孵育30 min。应用化学发光法检测三磷酸腺苷（ATP）含量及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性；用流式细胞仪检测血小板膜联蛋白Ⅴ（AnnexinⅤ）阳性率以反映磷酯酰丝氨酸（PS）暴露水平；用流式细胞仪测定血小板平均通道荧光强度（MCF）以反映线粒体内膜电位（ΔΨm）去极化。结果与对照组比较，凝血酶处理组血小板ATP水平明显降低〔相对荧光强度（RLU）：（5.46±0.14）x105比（6.25±0.26）x105，P0.05〕， AnnexinⅤ阳性率〔（50.43±2.45）%比（1.58±0.25）%，P0.05〕和caspase-3活性〔RLU：（26.92±1.60）x103比（1.30±0.10）x103，P0.05〕均明显升高，血小板MCF明显降低〔（8.32±0.58）x104比（13.05±1.10）x104，P0.05〕，说明ΔΨm去极化增加。给予不同浓度LPS处理后，血小板ATP水平、AnnexinⅤ阳性率和caspase-3活性均明显升高，血小板MCF明显降低，说明ΔΨm去极化增加，且呈浓度依赖性。与对照组比较，1μg/mL LPS即可使AnnexinⅤ阳性率增加〔（10.45±1.08）%比（1.58±0.25）%， P0.05〕，caspase-3活性升高〔RLU：（14.06±0.61）x103比（1.30±0.10）x103，P0.05〕，MCF明显降低〔（9.48±0.50）x104比（13.05±1.10）x104，P0.05〕。经100μg/mL LPS处理后血小板ATP水平、AnnexinⅤ阳性率和caspase-3活性最高，且均明显高于对照组〔ATP（RLU）：（7.00±0.03）x105比（6.25±0.26）x105， AnnexinⅤ阳性率：（55.35±2.42）%比（1.58±0.25）%，caspase-3（RLU）：（32.00±3.75）x103比（1.30±0.10）x103，均P0.05〕；血小板MCF最低，且明显低于对照组〔（4.69±0.55）x104比（13.05±1.10）x104，P0.05〕。结论大肠杆菌LPS可体外诱导小鼠血小板ATP升高、PS暴露、ΔΨm去极化及caspase-3活性增加，说明LPS可诱导血小板凋亡，且呈浓度依赖性。