大肠杆菌脂多糖体外诱导小鼠血小板凋亡的研究
A study of apoptosis of murine platelet induced by lipopolysaccharide derived fromEscherichia coli in vitro作者机构:天津医科大学一中心临床学院300192 天津市第一中心医院急救医学研究所300192 卫生部危重病急救医学重点实验室300384
出 版 物:《中华危重病急救医学》 (Chinese Critical Care Medicine)
年 卷 期:2015年第27卷第8期
页 面:677-681页
核心收录:
学科分类:100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 1011[医学-护理学(可授医学、理学学位)] 1010[医学-医学技术(可授医学、理学学位)] 10[医学]
基 金:天津市卫计委攻关课题(14KG101) 国家临床重点专科建设项目(2011-873)
摘 要:目的:观察大肠杆菌脂多糖(LPS)是否可在体外诱导小鼠血小板凋亡的发生。方法制备洗涤血小板悬液,调整血小板终浓度至3x108/mL。根据刺激剂不同分为对照组〔无钙台式缓冲液(TB)〕、凝血酶处理组(终浓度1 U/mL,无钙TB制备)和不同浓度LPS处理组(终浓度1、10、100μg/mL,无钙TB制备)。各组加入相应刺激剂后室温孵育30 min。应用化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)含量及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性;用流式细胞仪检测血小板膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)阳性率以反映磷酯酰丝氨酸(PS)暴露水平;用流式细胞仪测定血小板平均通道荧光强度(MCF)以反映线粒体内膜电位(ΔΨm)去极化。结果与对照组比较,凝血酶处理组血小板ATP水平明显降低〔相对荧光强度(RLU):(5.46±0.14)x105比(6.25±0.26)x105,P0.05〕, AnnexinⅤ阳性率〔(50.43±2.45)%比(1.58±0.25)%,P0.05〕和caspase-3活性〔RLU:(26.92±1.60)x103比(1.30±0.10)x103,P0.05〕均明显升高,血小板MCF明显降低〔(8.32±0.58)x104比(13.05±1.10)x104,P0.05〕,说明ΔΨm去极化增加。给予不同浓度LPS处理后,血小板ATP水平、AnnexinⅤ阳性率和caspase-3活性均明显升高,血小板MCF明显降低,说明ΔΨm去极化增加,且呈浓度依赖性。与对照组比较,1μg/mL LPS即可使AnnexinⅤ阳性率增加〔(10.45±1.08)%比(1.58±0.25)%, P0.05〕,caspase-3活性升高〔RLU:(14.06±0.61)x103比(1.30±0.10)x103,P0.05〕,MCF明显降低〔(9.48±0.50)x104比(13.05±1.10)x104,P0.05〕。经100μg/mL LPS处理后血小板ATP水平、AnnexinⅤ阳性率和caspase-3活性最高,且均明显高于对照组〔ATP(RLU):(7.00±0.03)x105比(6.25±0.26)x105, AnnexinⅤ阳性率:(55.35±2.42)%比(1.58±0.25)%,caspase-3(RLU):(32.00±3.75)x103比(1.30±0.10)x103,均P0.05〕;血小板MCF最低,且明显低于对照组〔(4.69±0.55)x104比(13.05±1.10)x104,P0.05〕。结论大肠杆菌LPS可体外诱导小鼠血小板ATP升高、PS暴露、ΔΨm去极化及caspase-3活性增加,说明LPS可诱导血小板凋亡,且呈浓度依赖性。