凋亡诱导因子AIF基因真核表达载体的构建及表达

作     者：邓雯文 刘蜀坤 张遵真 

作者机构：四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室成都610041 成都中医药大学公共卫生学院卫生毒理学教研室成都611137 

出 版 物：《四川大学学报（医学版）》 (Journal of Sichuan University(Medical Sciences))

年 卷 期：2013年第44卷第2期

页      面：170-174页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.81172632)资助 

主　　题：凋亡诱导因子 真核表达载体TA克隆转染 

摘      要：目的利用TA克隆法构建凋亡诱导因子(AIF)的真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),并研究其在人肺腺癌A549细胞中的表达。方法根据GenBank上AIF的mRNA序列设计特异性引物,以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增AIF基因。并用TA克隆法,将AIF目的基因连接到pUC-T载体,行双酶切和DNA测序鉴定;回收目的片段并将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组质粒AIF-pcDNA3.1(+)。最后,将AIF-pcDNA3.1(+)转染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测转染细胞AIF基因的表达。结果成功扩增617bp的AIF目的基因片段并连接pUC-T载体,测序后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,DNA序列分析显示,连接在真核表达载体上的基因片段与GenBank中的AIF序列完全吻合。RT-PCR和Western blot检测结果显示,转染了AIF-pcDNA3.1(+)的A549细胞AIF mRNA和蛋白表达水平均高于未转染细胞(P0.05)。结论成功构建了真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),转染后能够在A549细胞中表达。