血管紧张素Ⅰ型受体反义寡核苷酸对大鼠肾脏局部肾素-血管紧张素系统的阻断作用

作     者：刘英莉 马骥 孙晶 陆福明 刘少军 林善锬 顾勇 LIU Ying-li;MA Ji;SUN Jing;LU Fu-ming;LIU Shao-jun;LIN Shan-yan;GU Yong

作者机构：复旦大学附属华山医院肾脏科上海200040 

出 版 物：《中华肾脏病杂志》 (Chinese Journal of Nephrology)

年 卷 期：2005年第21卷第4期

页      面：199-203页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家教育委员会霍英东基金(81038)上海市教育委员会曙光计划(SG-01008)上海市科学技术发展委员会糖尿病重大课题(02DJ14052)上海市科学技术委员会科研计划项目(03JC14084) 

主　　题：局部肾素-血管紧张素系统 阻断作用 Ⅰ型受体 反义寡核苷酸 大鼠 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) Western印迹 免疫组织化学方法 AS-ODN mRNA水平 放射自显影 RT-PCR FITC标记 免疫组化检查 基因转移方法 动脉注射 定量分析 蛋白水平 

摘      要：目的 研究血管紧张素Ⅰ型受体(AT1)反义(AS)寡核苷酸(ODN)对大鼠肾脏局 部肾素-血管紧张素系统(RAS)的阻断作用。方法 采用单侧肾动脉注射+原位电穿孔的方法, 将AT1 AS-ODN导入到Wistar大鼠的一侧肾脏,观察以FITC荧光标记的ODN在肾脏的转移位 置,以AT1放射自显影定量分析的方法观察转移基因的时间-效应曲线。在基因转移3d后以 RT-PCR、Western印迹及免疫组织化学方法检测肾脏AT1的mRNA和蛋白表达与分布,并与正 义(Sen)ODN转移、假注射+肾脏原位电穿孔(Sham)作为对照。结果FITC标记的ODN在基因 转移10 min后主要定位于转移侧肾脏的肾小球,而对侧肾脏FITC荧光阴性。AT1放射自显影定 量分析显示在基因转移后的3 d内,结合有血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的AT1较未转移的对侧肾脏 减少约70％。AT1 AS-ODN基因转移后3 d,转移侧肾脏AT1 mRNA水平较对侧肾脏下降约 43％,蛋白水平下降约67％,而与AT1 Sen-ODN和Sham组转移侧肾脏比较,AT1的mRNA水平 下降分别约47％和51％,蛋白水平下降分别约63％和71％。免疫组化检查发现AT1的阻断以系 膜区的表达减少为主。结论 本研究所用的单侧肾动脉注射+原位电穿孔的基因转移方法成功 地抑制了单侧肾脏的肾小球AT1受体的表达,为研究全身性疾病肾损害中肾脏局部RAS的短