胰岛素受体的配体结合结构域的克隆与表达

作     者：张弘 乔志松 冯佑民 

作者机构：上海生物化学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 分子生物学国家重点实验室!上海200031 

出 版 物：《Acta Biochimica et Biophysica Sinica》 (生物化学与生物物理学报(英文版))

年 卷 期：2000年第32卷第6期

页      面：627-632页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0703[理学-化学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助 (No .39670 179)~~ 

主　　题：胰岛素 受体 胞外结构域 

摘      要：用PCR方法从人胎盘cDNA库中获得编码胰岛素受体α亚基中结合胰岛素的相对独立的结构域L1、L2以及人工设计的L1 (Ala) 10 L2的基因 ,克隆入含T7噬菌体RNA聚合酶启动子的表达质粒 pET 3a中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,用IPTG诱导表达成功。DNA测序、氨基酸组成分析以及蛋白质N端测序证明所表达的蛋白质正确。经过包涵体的分离、洗涤、溶解和纯化 ,得到了纯的变性状态受体的胰岛素高亲和结构域L2、低亲和结构域L1及用 10个丙氨酸相连的两结构域L1 (Ala) 10 L2 ,它们都远小于α亚基且不会由于形成链间二硫键而聚集 ,为进一步研究“胰岛素 受体 (结构域 )复合物的性质 ,探索复合物的结晶打下了良好的基础