猪圆环病毒贵州株ORF2基因的克隆及表达载体的构建

作     者：甘振磊 汤德元 李春燕 曾智勇 王凤 刘建 郝飞 

作者机构：贵州大学动物科学学院贵阳550025 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2013年第5期

页      面：95-98页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：贵州省2011年农业攻关项目(黔科合NY字(2011)3103号) 

主　　题：猪圆环病毒 ORF2基因 原核表达载体 真核表达载体 构建 

摘      要：为了研究猪圆环病毒(PCV)的分子生物学诊断技术和基因工程疫苗,试验根据GenBank公布的PCV ORF2基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,从贵州省某猪场的疑似猪圆环病毒组织病料中提取DNA,采用PCR技术扩增PCV ORF2基因,克隆到pMD19-T载体并测序,将构建好的T载体双酶切,回收目的片段与pET-32a(+)载体及pcDNA3.1(+)载体连接并转化入TOP10中构建原核、真核表达载体,并将ORF2基因插到重组质粒pcDNA3.1-IL-2上,构建以IL-2融合表达真核载体。结果表明:克隆的PCV ORF2基因全长为719 bp,ORF为702 bp,编码233个氨基酸,与Gen-Bank公布的PCV ORF2基因的核苷酸同源性为98.4%。说明试验成功克隆了猪圆环病毒贵州地方毒株ORF2基因,并成功构建了PCV ORF2原核、真核表达载体及以IL-2融合表达真核载体。