SHV-59型β-内酰胺酶的克隆与表达

作     者：卢月梅 张阮章 王沙燕 胡玉华 穆雪鵾 何林 陈升汶 LU Yue-mei;ZHANG Ruan-zhan;WANG Sha-yan;HU Yu-hua;MU Xue-kun;HE Lin;CHEN Sheng-wen

作者机构：深圳市人民医院 暨南大学第二临床学院检验科广东深圳518020 

出 版 物：《中国微生态学杂志》 (Chinese Journal of Microecology)

年 卷 期：2009年第21卷第9期

页      面：825-826,832页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 10[医学] 

主　　题：β-内酰胺酶 原核表达 等电聚焦电泳 

摘      要：目的构建SHV-59型β-内酰胺酶的表达载体。方法抽提菌株的质粒,应用PCR扩增SHV-59基因全长编码序列,扩增产物经Nde I、Xho I酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(PI)。结果PCR扩增获得879 bp的产物,重组表达载体经Nde I、Xho I酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,表明载体[pET-26b(+)/SHV-59]构建成功。目的等电点为7.6。结论β-内酰胺酶SHV-59在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。