利用DNA免疫法制备植物选择标记基因hpt表达蛋白抗体的研究

作     者：杨丽琛 朱祯 杨晓光 

作者机构：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室北京100050 中国科学院遗传研究所植物遗传分子操作开放实验室北京100101 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2003年第19卷第3期

页      面：248-251页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家重点基础研究发展计划 (973)项目 (2 0 0 1CB1 0 90 0 1 2 0 0 1AA2 1 2 0 4 1 ) 国家高技术研究发展计划 (863)项目(2 0 0 1AA2 1 2 0 4 1 2 0 0 1AA2 1 2 2 91 ) 科技部转基因植物及其产品安全性评价研究专项资助 (J0 0 C 0 0 3) 

主　　题：DNA免疫法 hpt 多克隆抗体 安全性评价 

摘      要：目的 :制备转基因作物中选择标记基因潮霉素B磷酸转移酶 (hygromycinBphosphotransferase,hpt)基因表达产物的多克隆抗体 ,并探讨影响核酸免疫效果的因素及相应机制。方法 :以hpt的cDNA全长插入真核表达载体 pCDNA3中 ,并经限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定。以纯化的重组质粒pCDNA3 HPT免疫BALB/c小鼠。用在E .coli中表达并纯化的 (His) 6 HPT进行ELISA ,检测免疫过程中小鼠血清抗体效价的增长状况 ,并用Westernblot检测抗血清的特异性。结果 :经 3次核酸免疫后 ,小鼠血清中未发现明显的抗HPT抗体。第 4次加强免疫时 ,将小鼠分为 3组 ,每组两只。第 1组改用去内毒素的质粒提取试剂盒提纯的重组质粒免疫 ,第2组用 (His) 6 HPT融合蛋白免疫 ,第 3组仍用原来提取的重组质粒免疫。结果发现 ,第 1组小鼠抗血清的效价有所上升 ,经ELISA检测达 1∶2 0 0 ;第 2组抗血清的滴度显著升高 ,达到 1∶2 0 0 0 ;而第 3组小鼠血清中仍未检测到明显的抗体。Westernblot证实 ,前两组抗血清均可与亲和层析纯化的GST HPT、(His) 6 HPT融合蛋白及其诱导表达的相应菌体总蛋白发生特异性结合。结论 :用DNA免疫法成功地制备了抗hpt基因表达产物的特异性抗体 ,但抗体效价不够理想。推测与hpt基因本身的性质及其在体内表达呈现的水?