结核抗原ESAT-6基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达

作     者：王庆敏 胡振林 孙树汉 张巧敏 

作者机构：第二军医大学医学遗传学教研室 河北省胸科医院 

出 版 物：《中华传染病杂志》 (Chinese Journal of Infectious Diseases)

年 卷 期：2003年第21卷第1期

页      面：30-32页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主　　题：结核分支杆菌 ESAT-6 基因表达 克隆 大肠埃希菌 结核病 预防 

摘      要：目的 将结核分支杆菌ESAT抗原编码区基因克隆 ,并使其在大肠埃希菌中表达。方法 培养并抽提结核分支杆菌基因组 ,采用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码ESAT的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建 pGEX5T ESAT重组质粒。IPTG诱导使该基因在k80 2菌中表达 ,并用免疫印迹 (Westernblot)方法确证表达蛋白的特异性。结果 PCR扩增获得了单一的条带 ,大小约 0 .3kb ;全自动测序与Genbank中登录的序列完全相同。获得了 pGEX5T ESAT重组子并在k80 2菌中表达 ,该蛋白可被结核病患者血清特异地识别。结论 扩增和克隆了结核杆菌ESAT抗原的全长cDNA并在大肠埃希菌中获得表达 ,为进一步研究其在结核病诊断和防治中的应用打下了基础。