结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药相关分子特征分析

作     者：罗振华 钱雪琴 范齐文 方欢英 郭建 吴文娟 Luo Zhenhua;Qian Xueqin;Fan Qiwen;Fang Huanying;Guo Jian;Wu Wenjuan

作者机构：同济大学附属东方医院医学检验科上海200123 贵州省人民医院中心实验室贵阳550002 复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2015年第35卷第9期

页      面：660-665页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金（81201340） 浦东新区卫生系统学科带头人计划（PWRd2012-09） 浦东新区卫生系统重点专科建设（PWZz2013-03） 

主　　题：结核分枝杆菌 吡嗪酰胺 耐药 分子特征 

摘      要：目的：探讨结核分枝杆菌（ Mycobacterium tuberculosis，MTB）吡嗪酰胺（ pyrazinamide， PZA）耐药表型与耐药相关基因pncA的关系，对未发现pncA突变的菌株进行panD、rpsA基因分析。方法采用MGIT960仪器法检测108株结核分枝杆菌临床分离株对一线抗结核药物（包括PZA）的敏感性，采用PCR DNA测序技术对菌株进行16S rDNA和pncA、panD、rpsA基因扩增及序列分析。结果78株耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）及利福平单耐菌株中PZA耐药47株（60％），30株对一线抗结核药物（乙胺丁醇、异烟肼、利福平、链霉素，简称EIRS）敏感的菌株中PZA耐药4株（13％），耐药结核分枝杆菌中PZA耐药率显著高于EIRS敏感株。51株PZA耐药MTB菌株中49株（96％） pncA基因发生了突变，57株PZA敏感株中4株（7％）发生突变， PZA耐药株pncA基因突变率显著高于PZA敏感株。 PZA耐药菌株的pncA基因改变以碱基置换为主，His57 Asp氨基酸改变较为常见。碱基突变区域集中在160～169、203～289、309～396和413～467。 pncA基因突变序列分析发现7个新的突变位点：T175 C、C188 A、68位碱基插入G、235位碱基插入AGC、339位碱基插入C、392位碱基插入CC、395位碱基缺失GT。 PZA敏感菌株中发现的4个pncA基因突变位点与耐药株突变位点均不相同。 PZA表型耐药但pncA基因及上游调控序列无突变的菌株NJ108存在panD G419A突变，但rpsA基因为野生型。结论耐药结核分枝杆菌中PZA耐药率较高。吡嗪酰胺耐药结核分枝杆菌中pncA基因突变较为常见，panD基因突变的出现亦值得关注。