黏菌素耐药细菌mcr-1基因TaqManPCR快速检测方法的建立

作     者：尚伟 代稳 陈北方 王玫 邹大阳 仓宝成 Shang Wei;Dai Wen;Chen Beifang;Wang Mei;Zou Dayang;Cang Baocheng

作者机构：中国人民解放军第一五三中心医院郑州450042 郑州轻工业学院450002 中国人民解放军疾病预防控制所北京100071 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2018年第38卷第9期

页      面：710-715页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金（61704157） 

主　　题：黏菌素耐药 mcr-1基因 PCR检测 TaqMan探针 

摘      要：目的 建立一种快速灵敏准确的分子检测方法用来检测临床分离菌株中的mcr-1基因.方法 根据mcr-1基因的序列设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,同时构建含有mcr-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品,采用TaqMan探针荧光定量PCR方法检测耐药基因mcr-1,并对方法的敏感性、重复性和特异性进行评价.结果 TaqMan探针荧光定量PCR结果显示起始模板量与Ct值之间存在良好的线性关系（R2〉0.999）,检出下限为10拷贝/μl,比常规PCR敏感性高100倍;特异性检测显示只有含mcr-1基因的菌株结果为阳性,其余菌株为阴性;组内及组间重复性试验的变异系数均小于1％.利用所建立的方法对150株临床分离的耐药菌株进行检测,检测到2株菌株携带mcr-1耐药基因,2株菌株鉴定均为大肠杆菌.结论 建立的TaqMan探针荧光定量PCR检测耐药基因mcr-1的方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点,可用于临床检验上特异性检测携带mcr-1基因的临床耐药菌株,为临床药物治疗提供更好的依据.