核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及其表达

作     者：操海萍 舒振波 张桂珍 CAO Hai-ping;SHU Zhen-bo;ZHANG Gui-zhen

作者机构：吉林大学中日联谊医院中心实验室 吉林大学中日联谊医院胃肠外科长春130031 

出 版 物：《肿瘤》 (Tumor)

年 卷 期：2007年第27卷第5期

页      面：345-347,360页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：吉林省科技厅发展计划资助项目(编号:20061550) 

主　　题：基因扩增 基因,Decorin 转染 HCT-8细胞 

摘      要：目的:构建人核心蛋白聚糖(decorin,DCN)真核表达载体,并在人结直肠癌HCT-8细胞中进行表达,以研究其抗肿瘤作用。方法:以克隆有完整人DCN基因片段的质粒pBluescript为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因片段。真核表达载体pcDNA3及PCR产物经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,转化大肠杆菌JM109,获得重组载体pcDNA-DEC,进行酶切鉴定和测序鉴定。脂质体lipofectamine介导重组载体转染HCT-8细胞,经G418(800μg/mL)筛选建立稳定转染细胞株。采用免疫组化法检测转染后HCT-8细胞中DCN的表达。MTT法检测HCT-8细胞的增殖活力。结果:PCR扩增获得与预期大小一致、约1 000 bp的特异性DNA片段;重组载体pcDNA-DEC经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中。免疫组化结果显示在稳定转染的HCT-8细胞株中可见DCN蛋白表达。细胞生长曲线显示转染DCN的HCT-8细胞生长较对照组减慢。结论:成功构建DCN真核表达载体pcDNA-DEC,并获得稳定转染的HCT-8细胞株,为进一步研究DCN抗肿瘤作用奠定基础。