人乳头瘤病毒16型E7蛋白的表达、纯化及抗血清制备

作     者：颜学勤 王莹莹 嵩钰佳 王鑫 陈思佳 魏兰兰 钟照华 商庆龙 Yan Xueqin;Wang Yingying;Song Yujia;Wang Xin;Chen Sijia;Wei Lanlan;Zhong Zhaohua;Shang Qinglong

作者机构：哈尔滨医科大学微生物学教研室150081 

出 版 物：《国际免疫学杂志》 (International Journal of Immunology)

年 卷 期：2018年第41卷第5期

页      面：514-518页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：黑龙江省教育厅面上项目(12541327) 

主　　题：人乳头瘤病毒16型 E7蛋白 抗血清 

摘      要：目的建立人乳头瘤病毒(human papillomavims,HPV)16型E7蛋白的原核表达系统,表达HPv16E7蛋白,制备小鼠抗HPV16E7血清。方法采用PCR方法扩增HPV16E7基因,构建人pET21b质粒,重组表达载体经鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。诱导表达后经十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和westemblot鉴定表达产物。提取包涵体进行变性复性处理后纯化,纯化后的可溶性蛋白免疫Balb/C小鼠,检测小鼠体内γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平、CD4/CD8比值和抗血清滴度变化。结果PcR扩增片段为0.3Kb,酶切和序列测定证实重组质粒构建正确。SDS—PAGE在11KD处出现蛋白条带。蛋白表达以包涵体为主。免疫后小鼠抗体效价升高,CD4/CD8比值无升高,IFN-γ无反应。结论成功制备可溶性HPV16E7蛋白和小鼠抗HPvl6E7高效价抗血清。