编码草菇中性内切葡聚糖酶Ⅰ的基因克隆与表达研究

作     者：王超凯 李剑芳 司晨妍 王瑾 孙军亭 邬敏辰 Wang Chaokai;Li Jianfang;Zhou Chenyan;Wang Jin;Sun Junting;Wu Minchen

作者机构：江南大学食品学院 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学医药学院 

出 版 物：《食品与发酵工业》 (Food and Fermentation Industries)

年 卷 期：2008年第34卷第7期

页      面：7-11,16页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(No.20776061) 

主　　题：中性内切葡聚糖酶Ⅰ 草菇 毕赤酵母 分泌表达 

摘      要：采用RT-PCR法,以草菇*** V23总RNA为模板,克隆了包括自身信号肽在内的中性内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egⅠ)的cDNA序列。测序结果表明,它全长1167 bp,编码389个氨基酸,推测第1～23位氨基酸为信号肽,第24～389位氨基酸为成熟肽,属于糖苷水解酶第5家族。PCR扩增成熟肽编码基因并将其插入到分泌型表达载体pPIC9K中,重组载体经SalⅠ线性化后电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,筛选得到了1株高产中性内切葡聚糖酶Ⅰ的工程菌株***-EGⅠ1。SDS-PAGE检测表明,重组中性内切葡聚糖酶Ⅰ分子质量约为42 ku。在甲醇诱导96h时,酶活达到3 698 U/mL。