PCR法制备地高辛标记探针改良PCR-Select Differential Screening试剂盒

作     者：肖军 邹飞 蔡绍曦 

作者机构：第一军医大学热带军队卫生学系 南方医院呼吸内科广东广州510515 

出 版 物：《中国应用生理学杂志》 (Chinese Journal of Applied Physiology)

年 卷 期：2004年第20卷第2期

页      面：205-208页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 ( 3 0 3 715 75 3 0 2 70 5 93 ) 广东省自然科学基金资助项目 ( 3 2 83 5 ) 

主　　题：抑制性消减杂交 地高辛 标记探针 同位素 PCR 

摘      要：目的 :探讨采用地高辛 (digoxin ,DIG)标记探针替代PCR Selectdifferentialscreening试剂盒中同位素标记探针的方法。方法 :抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)所分离的差异表达序列转移至硝酸纤维素膜 ,以PCR法掺入DIG 11 dUTP制备探针 ,按DIG标记探针常规操作进行杂交显色 ,杂交阳性结果采用reverseNorthernblot再度杂交验证。结果 :应用DIG标记探针改良PCR SelectDifferentialScreening试剂盒所得到的阳性结果经reverseNorthernblot验证符合率达到 90 %。结论 :DIG标记探针改良PCR Selectdifferentialscreening试剂盒在避免了放射污染同时具备很高的特异性 ,完全可以替代同位素标记探针。