小檗碱对体外HepG2细胞IR模型抗IR的效应及机制
Effect of Berberine on HepG2 IR Model and Its Mechanism作者机构:北京中医药大学中医学院
出 版 物:《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)
年 卷 期:2018年第24卷第21期
页 面:138-143页
学科分类:1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100501[医学-中医基础理论] 100502[医学-中医临床基础] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床]
主 题:小檗碱 胰岛素抵抗 HepG2细胞 胰岛素受体底物-1 (IRS-1)/磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)/葡萄糖转运蛋白2 (GLUT2)通路
摘 要:目的:探讨小檗碱对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的改善作用及机制。方法:HepG2细胞采用高糖(25 mmol·L(-1))和高胰岛素(1×10(-6)mol·L(-1))联合诱导24 h,建立体外IR模型。模型培养液中分别加入1×10(-5),1×10(-6)mol·L(-1)小檗碱,设1×10-3mol·L(-1)二甲双胍作为阳性药,孵育24 h。葡萄糖氧化酶法检测培养液葡萄糖含量,计算细胞葡萄糖消耗量,细胞增殖活性检测(CCK-8)测定细胞增殖活性;生化法检测细胞丙酮酸激酶(PK)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞葡萄糖激酶(GCK)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞胰岛素受体(InsR),磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)和GLUT2 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1),磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞葡萄糖消耗量显著降低(P〈0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著降低(P〈0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA表达水平显著降低(P〈0.01),IRS-1,p-PI3K,p-Akt蛋白表达水平显著降低(P〈0.01)。与模型组比较,小檗碱组和二甲双胍组的细胞葡萄糖消耗量明显增加(P〈0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著升高(P〈0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA和IRS-1,p-PI3K,p-Akt1蛋白表达水平均明显升高(P〈0.05,P〈0.01)。结论:小檗碱体外对HepG2细胞IR模型有显著的改善作用,其机制可能通过调节IRS-1/PI3K/Akt信号通路促进肝脏葡萄糖转运和改善葡萄糖代谢。