H3亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立
Establishment of Fluorescent Quantitative PCR Assay for SIV H3 Serotype Detection作者机构：郑州职业技术学院河南郑州450121 河南省生物工程技术研究中心河南郑州450001
出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)
年 卷 期：2009年第30卷第6期
页 面：30-35页
学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学]
主 题：猪流感病毒 H3亚型 荧光定量PCR TaqMan探针
摘 要：通过RT-PCR方法克隆了H3亚型猪流感病毒HA基因一段靶序列，构建重组质粒作为标准阳性模板。根据GenBank中的H3亚型猪流感病毒HA基因保守序列设计了用于FQ-PCR的1对引物和1条TaqMan探针。通过条件优化，以10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增，并制作标准曲线，建立了检测H3亚型猪流感的荧光定量PCR方法。结果表明，该方法检测灵敏度可达1．0×10^0拷贝／μL，线性范围为10^9-10^0，达10个数量级；对起始浓度为1．0×10^9、1．0×10^8、1．0×10^7拷贝／μL的标准品的最终实际测得值（Ct）分别为13．68，18．21和20．57；变异系数分别为0．31％、0．17％和0．12％，均小于5％，说明此方法具有良好的准确性和重现性。对阳性组织病料的检测表明，该方法的检测灵敏度高出常规PCR，与套式PCR具有相近的灵敏度。
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