产气荚膜梭菌α毒素C末端与中和抗原表位的串联表达及免疫保护性分析

作     者：杜吉革 薛麒 朱真 彭小兵 张秀坤 李启红 印春生 姚文生 康凯 陈小云 DU Ji-ge;XUE Qi;ZHU Zhen;PENG Xiao-bing;ZHANG Xiu-kun;LI Qi-hong;YIN Chun-sheng;YAO Wen-sheng;KANG Kai;CHEN Xiao-yun

作者机构：中国兽医药品监察所北京100081 

出 版 物：《中国兽药杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Drug)

年 卷 期：2018年第52卷第8期

页      面：1-6页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：科技部十三五"牛羊重要疫病免疫防控新技术研究"重点专项课题(2017WFD0500903) 

主　　题：产气荚膜梭菌α毒素 C末端 中和抗原表位 串联表达 抗原性 

摘      要：为获得产气荚膜梭菌α毒素(CPA)的C末端(CPAC)与中和抗原表位NE(ARGFAK)的串联融合蛋白并评价其免疫原性,对已知的A型产气荚膜梭菌CPAC及NE的编码基因进行优化设计,并将两个基因的三拷贝序列串联,经人工合成获得基因片段GCPAC3NE3。将该片段克隆至原核表达载体p ET30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白。利用Western blot方法检测重组蛋白与A型产气荚膜梭菌毒素抗血清的反应性。随后,以纯化的重组蛋白免疫家兔,根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测家兔血清的中和抗体效价。在二免后21 d,以1个MLD的A型产气荚膜梭菌毒素对家兔进行攻毒。结果表明重组蛋白主要以包涵体的形式存在表达且能与A型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应。每毫升的一免抗血清可中和40个最小致死量(MLD)、二免抗血清可中和80个MLD的A型产气荚膜梭菌毒素;1个MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组4/4死亡,免疫组得到了100%(4/4)的保护。以上结果说明,重组蛋白具有良好的免疫原性,从而为A型产气荚膜梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的实验数据。