用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除

作     者：贾洪革 吕玲飞 庞永奇 陈晓英 方荣祥 JIA Hong-Ge1 L Ling-Fei 1,2 PANG Yong-Qi 1,3 CHEN Xiao-Ying1 FANG Rong-Xiang 1* 1(Laboratory of Plant Biotechnology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China) 2(College of Life Sciences, Beijing Normal University, Beijing 100875, China) 3(College of Life Sciences, Northwest Science and Technology University of Agriculture and Forestry, Yangling 712100, China)

作者机构：中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室北京100080 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2004年第20卷第1期

页      面：10-15页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家高技术研究发展计划 ( 863计划 )资助 (No.2 0 0 2AA2 2 70 3 1) 

主　　题：选择标记基因 转基因植物 绿色荧光蛋白 瞬间表达 化学诱导表达 

摘      要：绿色荧光蛋白 (GFP)可直接进行活体观察 ,它的这个优点可被用于监测转基因植物中选择标记基因的消除。为此 ,构建了植物表达载体pGNG ,将绿色荧光蛋白基因 (gfp)和卡那霉素抗性基因表达盒 (NosP nptII NosT)一起克隆在两个同向的lox位点间 ,在第一个lox位点上游置有CaMV 35S启动子以驱动GFP表达 ,第二个lox位点下游置有不含启动子的大肠杆菌 β 葡萄糖醛酸酶 (GUS)基因。首先在含卡那霉素 (Kan)的培养基上筛选出转pGNG的烟草 ,借助绿色荧光可容易地检出表达GFP的转化体。然后用另一转化载体pCambia130 0 Cre二次转化表达GFP的转基因植物 ,利用另一选择标记基因 潮霉素抗性基因 (hpt)进行筛选 ,在获得的再生植株中 ,Cre重组酶的表达消除了转化体中两lox位点间的gfp和nptII。实验结果表明可借助GFP荧光的消失 ,快速选出nptII被消除的二次转化体 ,同时GUS(作为目的蛋白 )在CaMV 35S启动子驱动下获得表达。最后利用后代的分离将hpt和cre除去。