秋茄KcRD22基因的克隆与功能分析

作     者：黄旭新 侯佩臣 丁明全 王美娟 邓澍荣 李妮亚 周晓阳 沈昕 陈少良 Huang Xuxin;Hou Peichen;Ding Mingquan;Wang Meijuan;Deng Shurong;Li Niya;Zhou Xiaoyang;Shen Xin;Chen Shaoliang

作者机构：北京林业大学生物科学与技术学院教育部树木花卉遗传育种重点实验室北京100083 国家农业信息化工程技术研究中心北京100097 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2011年第30卷第4期

页      面：273-280页

学科分类：07[理学] 0713[理学-生态学] 

基　　金：北京市优秀博士学位论文指导教师专项基金(YB20081002201) 教育部重点项目(209084) 国家自然科学基金项目(30872005) 北京市自然科学基金项目(6112017) 中央高校基本科研业务费专项资金(JC2011-2) 

主　　题：秋茄 KcRD22 转基因烟草 抗盐性 

摘      要：本文以用200mmol/LNaCl处理24h后的秋茄幼苗为材料提取秋茄叶片总RNA,利用RT-PCR方法克隆获得KcRD22基因的全长cDNA,通过构建pCAMBIA-2300-KcRD22过表达载体,利用农杆菌侵染的方式获得过表达KcRD22的烟草转基因株系,并对转基因株系的耐盐性做出初步分析。实验结果显示:KcRD22基因的ORF长1131bp,编码1个等电点为9.07、分子量为39.8kD、由375个氨基酸组成的蛋白。PCR及RT-PCR鉴定结果表明,KcRD22基因已经分别整合到8株烟草的染色体中,并在两个株系中获得表达。对转基因烟草进行光合作用测定,结果显示100mmol/LNaCl处理显著降低了野生型烟草的净光合速率,而转基因植株叶片的光合作用受到的影响较小。盐浓度达到200mmol/L时,转基因植株及野生型烟草净光合速率都明显降低,但盐胁迫解除后,转基因烟草光合作用的恢复情况明显好于野生型烟草,说明KcRD22的过表达提高了烟草的抗盐性。本文初步确定了KcRD22基因对植物耐盐性的贡献,这为进一步深入研究该基因在耐盐机制中的功能奠定了良好基础。