PolⅡ型启动子K14实现组织特异RNAi

作     者：代蓉 沈思军 万鹏程 石国庆 孟庆勇 刘守仁 DAI Rong;SHEN Si-Jun;WAN Peng-Cheng;SHI Guo-Qing;MENG Qing-Yong;LIU Shou-Ren

作者机构：石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆农垦科学院新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室石河子832000 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193 

出 版 物：《遗传》 (Hereditas（Beijing))

年 卷 期：2011年第33卷第7期

页      面：757-762页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：转基因生物新品种培育重大专项(编号:2008ZX08008-001 2009ZX08008-001B) 国家自然科学基金项目(编号:31001002)资助 

主　　题：组织特异 RNAi K14启动子 融合转录本 转基因家畜 

摘      要：RNAi(RNA interference,RNAi)是继基因打靶技术后的一种高效的研究基因功能的方法。细胞学实验和小鼠模型的研究结果表明,PolⅡ型启动子可以实现组织特异的RNA干扰,从而为鉴定基因在特定组织中的功能及作用机理提供了一个强有力的研究方法。为了能将这种方法用于转基因绵羊生产,探讨基因与绵羊毛囊发育的关系及其作用机制等,文章利用PolⅡ型CMV启动子和毛囊组织特异表达的人角蛋白14(K14)基因的启动子驱动eGFP-shRNA融合转录本的生成,从而实现敲低目的基因的表达。体外基因表达沉默效率分析(pEGFP-C1-shRNA和psiCHECK-BMP4双质粒共转染Hela细胞)结果表明,6个干扰序列均能有效地抑制BMP4基因的表达,抑制效率达到60%以上;体内表达沉默分析(只转染pEGFP-K14-shRNA质粒转染小鼠皮肤细胞系JB6-C41)的实验结果与体外分析结果相似,除3#序列外,其余干扰序列对BMP4基因的抑制效率都在60%以上,其中5#序列的效率达到80%以上。siRNA诱导的目标基因沉默中mRNA和蛋白水平的下降显著正相关。结果表明,设计构建的由PolⅡ型启动子K14驱动eGFP-shRNA融合转录本的形成,从而实现RNAi的研究方法是可行的,利用这种方法可以实现在特定细胞中敲低目的基因的表达水平。为在大家畜特别是绵羊中应用RNAi的方法分析目的基因在毛囊发育、对不同类型毛囊生长发育的诱导和调节等作用机理的研究提供一个参考方法。