小鼠T279基因敲除胚胎干细胞的构建

作     者：杨超 王朝亮 张天标 殷正伟 王瑞 YANG Chao;WANG Chaoliang;ZHANG Tianbiao;YIN Zhengwei;WANG Rui

作者机构：郑州大学第一附属医院泌尿外科郑州450052 

出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))

年 卷 期：2018年第53卷第4期

页      面：448-452页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主　　题：T279 基因敲除 打靶载体 同源重组 小鼠 

摘      要：目的:利用打靶载体技术构建小鼠T279基因敲除胚胎干细胞模型。方法:订购含小鼠T279基因的129BAC质粒和PL452,PCR扩增Retrieving同源臂及loxp-neo-loxp片段,利用PL253质粒进行目的片段的连接,并在EL350大肠杆菌中进行同源重组,构建T279打靶载体,将其电转染小鼠胚胎干细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组的阳性克隆。结果:经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定,T279打靶载体构建成功。Southern blot结果显示成功筛选到同源重组的敲除T279基因的胚胎干细胞克隆。结论:T279基因敲除打靶载体构建成功并筛选到了同源重组阳性的胚胎干细胞克隆。