大肠杆菌中dctA基因敲除及其苹果酸摄取功能鉴定

作     者：姜巨全 张正来 徐桐 孟琳 JIANG Juquan;ZHANG Zhenglai;XU Tong;MENG Lin

作者机构：东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 

出 版 物：《东北农业大学学报》 (Journal of Northeast Agricultural University)

年 卷 期：2018年第49卷第5期

页      面：45-52页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31770051 31570087) 

主　　题：大肠杆菌K12 dctA λRed重组 基因敲除 四碳-2-羟基羧酸 

摘      要：大肠杆菌(Escherichia coli)K12基因组中,仅dctA基因编码1个在有氧条件下负责摄取四碳-二羧酸的转运蛋白。为鉴定Dct A能否摄取四碳-2-羟基羧酸(如苹果酸),首先以p KD3为模版PCR扩增含有氯霉素抗性dctA基因同源臂,电转入*** K12/p KD46感受态细胞,筛选具有氯霉素抗性的基因敲除突变株***ΔdctA/p KD46。通过消除质粒p KD46构建大肠杆菌dctA基因敲除突变株***ΔdctA。构建dctA基因表达载体p Easy T3-dctA。通过苹果酸摄取功能互补试验,证实基因敲除菌株***ΔdctA丧失摄取苹果酸功能,四碳-二羧酸摄取蛋白Dct A具有摄取苹果酸功能。研究首次报道Dct A具有摄取苹果酸功能,该基因敲除突变株的构建可为其他菌株来源2-HCT转运蛋白的基因克隆与功能分析奠定基础。