细粒棘球绦虫转酮醇酶克隆表达及免疫性分析
Cloning,expression and immunity analysis of transketolase of Echinococcus granulosus作者机构:青海大学医学院病原生物学教研室西宁810001 青海大学附属医院、青海省包虫病研究重点实验室
出 版 物:《中国血吸虫病防治杂志》 (Chinese Journal of Schistosomiasis Control)
年 卷 期:2018年第30卷第2期
页 面:155-160页
核心收录:
学科分类:1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学]
基 金:国家自然科学基金(81360255) 青海省科技厅重大专项(2016-SF-A5)
主 题:细粒棘球绦虫 棘球蚴病 转酮醇酶 重组质粒 诊断抗原
摘 要:目的通过原核表达获得细粒棘球绦虫转酮醇酶(TK)表达产物,分析其作为棘球蚴病诊断抗原分子的价值。方法 PCR扩增TK基因,克隆至原核载体p MD19-Eg TK,随后亚克隆至表达载体p ET-28a,构建目的基因TK原核表达质粒p ET-28a(+)-Eg TK,转入大肠埃希菌BL21,分离纯化蛋白,经SDS-PAGE、Western blotting鉴定后,收集细粒棘球蚴病(CE组)、多房棘球蚴病(AE组)患者及健康人(健康组)血清,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组蛋白作为诊断抗原的价值。结果成功构建p ET-28a(+)-Eg TK质粒,经SDS-PAGE和Western blotting分析,Eg TK蛋白在70 k Da处出现条带,与理论值一致。ELISA显示,CE组、AE组和健康组血清反应吸光度A450值间差异有统计学意义(F=44.47,P0.05)。结论重组TK分子可较好地区分棘球蚴病患者和非棘球蚴病患者,但无法区分细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者。