NF1微基因及突变体微基因的克隆与鉴定

作     者：姚林林 李珺 赵宏宇 蔡禄 Yao Linlin;Li Jun;Zhao Hongyu;Cai Lu

作者机构：内蒙古科技大学生物工程与技术研究所包头014010 内蒙古科技大学生命科学与技术学院包头014010 内蒙古自治区生物质能源化利用重点试验室包头014010 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2018年第37卷第4期

页      面：1832-1837页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(61271448 61671256 61662055) 内蒙古自然科学基金(2014MS0311)共同资助 

主　　题：可变剪接 NF1基因 微基因 

摘      要：Ⅰ型神经纤维瘤病（Neurofibromatosis typeⅠ,NF1）是一种常染色体的显性遗传病,其致病性是由NF1基因突变引起。NF1基因m RNA前体受可变剪接的影响,NF1微基因是研究其可变剪接机制的重要工具。本研究从人类外周血中提取基因组DNA,并设计出克隆NF1及突变目的片段的两对引物,利用PCR方法扩增目的片段并导入p EGFP质粒载体,从而构建了分别包含NF1微基因及突变体微基因的载体p EGFP-NF1和p EGFP-NF1m。分别用Bam HⅠ和HindⅢ对NF1微基因及突变体微基因进行双酶切鉴定,均得到预期片段,测序结果正确,表明成功构建了NF1微基因及突变体微基因载体。用转染试剂将NF1微基因和突变体微基因的质粒转染到Hela细胞中,荧光检测说明真核表达载体NF1微基因与突变体微基因成功转染到细胞中。本研究为后续NF1的m RNA前体可变剪接以及调控NF1剪接因子的研究提供了参考。