番鸭细小病毒Rep1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作     者：王志仙 凌珏怡 贾婧宇 王建业 朱国强 WANG Zhixian;LING Jueyi;JIA Jingyu;WANG Jianye;ZHU Guoqiang

作者机构：扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2018年第40卷第6期

页      面：15-18页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31572511) 江苏高校优势学科建设工程资助项目 

主　　题：番鸭细小病毒 Rep1蛋白 原核表达 间接免疫荧光试验 

摘      要：Rep蛋白在番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)感染中的作用尚不清楚。研究将MDPV的Rep1基因克隆入p ET-28a原核表达载体并转化BL21(DE3)大肠杆菌,在IPTG诱导下成功表达了分子量约为82 ku的目的蛋白,菌体分析表明目的蛋白主要以包涵体存在。将重组蛋白切胶免疫ICR小鼠,制备了针对Rep1蛋白的多克隆抗体。在间接免疫荧光试验中,Rep1多克隆抗体能与鹅胚成纤维细胞上增殖的MDPV特异性发生反应,免疫印迹试验则显示Rep1多克隆抗体能够在MDPV感染的GEF中识别出两条蛋白条带Rep1和Rep2。结果表明制备的Rep1多克隆抗体具有良好反应特异性,为深入研究Rep蛋白在MDPV感染中的作用奠定了基础。