大头金蝇β-actin基因克隆与多克隆抗体制备

作     者：张敏 张古忍 ZHANG Min1,2,ZHANG Gu-Ren2

作者机构：南华大学生物化学与分子生物学教研室湖南衡阳421001 中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室广州510275 

出 版 物：《环境昆虫学报》 (Journal of Environmental Entomology)

年 卷 期：2018年第40卷第1期

页      面：180-186页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0904[农学-植物保护] 

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金(3165004) 南华大学博士启动基金(2014XQD) 

主　　题：大头金蝇 β-actin 基因克隆 抗原多肽 Western Blot 

摘      要：为深入研究大头金蝇Chrysomya megacephala(Fabricius)关键功能基因的表达调控,运用RT-PCR和RACE技术,克隆获得大头金蝇β-actin基因cDNA全长序列(GenBank登录号为KC207081),并对其进行生物信息学分析。大头金蝇β-actin基因cDNA全长1 355 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 131 bp,编码376个氨基酸,5 UTR长度为87 bp,3 UTR约为110 bp。ORF编码的蛋白质分子量为41.8 D,等电点5.286,氨基酸序列与其他昆虫β-actin一致性高达97%-99%,且含有由6个β-actin蛋白家族特有的保守模式(motif)所构成的指纹。根据对β-actin氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性分析预测,设计并合成β-actin抗原多肽(CysGPYARVKRHQKGLKT),免疫新西兰兔获得多克隆抗体,其效价远高于1∶64 000。采用Western Blot技术检测大头金蝇各发育阶段的β-actin蛋白表达,结果表明β-actin表达恒定。本文的研究结果为大头金蝇功能基因的深入研究提供了坚实的基础。