地塞米松降解新基因的探讨

作     者：张进 斯丹 杨致邦 熊玉霞 马廉举 李津阳 蒋仁举 ZHANG Jin;SI Dan;YANG Zhi-bang;XIONG Yu-xia;MA Lian-ju;LI Jin-yang;JIANG Ren-j u

作者机构：重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学药学实验教学中心重庆400016 重庆医科大学临床医学专业一系重庆400016 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2018年第38卷第1期

页      面：15-24页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：重庆市渝中区科委科技计划资助项目(20160110) 

主　　题：伯克霍尔德菌 地塞米松 降解 基因 实时荧光定量 PCR 

摘      要：目的：探讨地塞米松降解代谢新基因,为构建高效、稳定的地塞米松降解基因工程菌提供思路。方法：根据新发现的地塞米松降解菌Burkholderia sp.CQ001（B.CQ001）全基因组测序和生物信息学分析,筛选疑似与地塞米松代谢相关的基因。提取B.CQ001总RNA逆转录为c DNA,以c DNA为模板,利用PCR技术快速克隆经实时荧光定量PCR技术（RT-q PCR）验证筛选出的新基因,测序鉴定后连接原核表达载体p ET-28a-c（＋）,构建重组质粒p ET-28a-Ivd。将p ET-28a-Ivd转化感受态B.CQ001,高效液相色谱（HPLC）验证表达菌降解能力的提升。结果：从B.CQ001基因组中筛选出3个未知基因,分别为ORF05499、ORF05827、ORF06535,其表达产物分别为过氧化物还原酶、甾酮异构酶、异戊酰辅酶A脱氢酶;RT-q PCR分析显示,3个目的基因在地塞米松诱导后均有不同程度表达上调,基因ORF06535表达上调明显;在B.CQ001中过表达基因ORF06535,HPLC检测显示,表达菌对地塞米松磷酸钠和地塞米松的降解率可达到89.0%和80.0%,相比原菌B.CQ001有明显提升。结论：在B.CQ001中发现新的地塞米松降解相关基因ORF06535,并完成基因克隆和功能验证,为制备地塞米松及甾体激素污染的生物修复剂提供了新的基因信息。