miR-18a过表达及抑制表达人鼻咽癌细胞株的构建

作     者：常利红 黄子真 黄健聪 王君 陈晓红 赖晓萍 张革化 CHANG Li-hong;HUANG Zi-zhen;HUANG Jian-cong;WANG Jun;CHEN Xiao-hong;LAI Xiao-ping;ZHANG Ge-hua

作者机构：中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科广东广州510630 

出 版 物：《中山大学学报（医学版）》 (Journal of Sun Yat-Sen University:Medical Sciences)

年 卷 期：2018年第39卷第1期

页      面：119-129页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100213[医学-耳鼻咽喉科学] 10[医学] 

基　　金：广东省科技计划项目(2014A020212619) 广东省自然科学基金博士启动项目(2015A030310073) 广东省自然科学基金(2014A030313142) 

主　　题：miR-18a 慢病毒 过表达载体 抑制载体 鼻咽癌细胞 

摘      要：【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系,为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中,DNA测序鉴定;将构建好的载体转染293T细胞,获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体,感染人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系,PCR及western blot鉴定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR-18a干扰载体及过表达载体,滴度均为3×10~8TU/mL;转染miR-18a抑制表达的慢病毒载体的CNE1和CNE2中ATM表达增高;与对照病毒转染相比,转染miR-18a过表达慢病毒载体的CNE1(20.3倍,P0.01)和CNE2(122.5倍,P0.01)中miR-18a表达显著增高,靶蛋白ATM表达下调。【结论】成功构建人miR-18a慢病毒抑制表达和过表达载体,并获得相应的慢病毒稳转人鼻咽癌细胞株。