穿心莲中1个新NADPH-细胞色素P450还原酶的克隆及功能鉴定

作     者：齐梦蝶 王健 马晓晶 张权 王方方 康莹 林慧馨 刘勇 QI Meng-die1,2, WANG Jian2, MA Xiao-jing2, ZHANG Quan1 , WANG Fang-fang1 , KANG Ying1 , LIN Hui-xin2 , LIU Yong1

作者机构：北京中医药大学北京100102 中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地北京100700 

出 版 物：《中国中药杂志》 (China Journal of Chinese Materia Medica)

年 卷 期：2018年第43卷第2期

页      面：309-315页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1005[医学-中医学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(ZZ2016026) 

主　　题：穿心莲内酯 生物合成途径 细胞色素P450还原酶 原核表达 功能鉴定 

摘      要：穿心莲内酯为传统中药穿心莲中的主要有效成分,具有多种药理活性,广泛运用于临床,但其生物合成途径尚未被解析。细胞色素P450还原酶为CYP450提供电子,在CYP450的催化过程中起重要作用。该研究通过同源比对筛选并克隆了穿心莲CPR的编码序列,命名为ApCPR4。原核表达ApCPR4蛋白,分离纯化后进行体外酶活鉴定,发现ApCPR4能够以NADPH依赖性方式还原细胞色素c和铁氰化物。为了验证其体内功能,将ApCPR4与CYP76 AH1共转化入酵母工程菌,结果表明,ApCPR4在酵母体内能够协助CYP76AH1催化生成铁锈醇。实时定量PCR结果显示,在茉莉酸甲酯（Me JA）处理的叶片中,ApCPR4的表达量逐渐增加。该表达模式与穿心莲内酯受Me JA诱导积累的趋势一致,推测ApCPR4与穿心莲内酯的生物合成相关。