禽源CCL19蛋白的表达纯化和抗体的制备

作     者：王秋霞 李鹏祥 李茵 刘兴友 余燕 张艳红 姜金庆 马金友 欧长波 WANG Qiu-xia;LI Peng-xiang;LI Yin;LIU Xing-you;YU Yan;ZHANG Yan-hong;JIANG Jin-qing;MA Jin-you;OU Chang-bo

作者机构：河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 新乡学院河南新乡453003 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2018年第48卷第2期

页      面：155-160页

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31402169) 畜禽疫病防控河南省高校科技创新团队支持计划资助项目(18IRTSTHN019) 河南科技学院2017年大学生创新创业训练项目(2017CX037) 

主　　题：趋化因子 CCL19 鸡 表达 多克隆抗体 

摘      要：为研究趋化因子CCL19在禽源疾病发生发展过程中的作用,利用RT-PCR技术,从攻毒后的鸡腔上囊组织克隆了禽源CCL19基因,测序结果显示,该基因ORF长300 bp,编码100个氨基酸,与Gen Bank中登录的禽源CCL19序列完全一致;将该基因亚克隆至原核表达载体p ET30a,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE进行初步分析,在约13 ku处出现明显蛋白条带,与预期结果相符;经镍柱纯化后,获得了高纯度的重组融合蛋白,Western-blot分析显示,纯化后的重组融合蛋白能够与抗His标签单克隆抗体发生特异性反应。将纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔进行多克隆抗体的制备,经Western-blot检测,制备的抗体能与CCL19蛋白发生特异性反应。本研究首次克隆并表达了禽源CCL19蛋白,并对该蛋白进行了纯化和抗体的制备,该基因的成功克隆、表达和纯化以及针对目的蛋白抗体的制备,为进一步研究趋化因子CCL19在禽源疾病发生发展过程中的作用奠定了基础。