小清蛋白中ErbB4免疫荧光染色条件的优化

作     者：耿迟 陈幽婷 侯筱宇 Chi Geng;Youting Chen;Xiaoyu Hou

作者机构：徐州医科大学江苏省脑病生物信息重点实验室生物化学与分子生物学研究中心江苏徐州221004 徐州医科大学解剖学教研室江苏徐州221004 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2017年第27卷第6期

页      面：586-591页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家自然科学基金项目("脑缺血突触后蛋白质SUMO化的调控及其病理意义" No.81473185) 

主　　题：PV ErbB4 免疫荧光 后固定 抗原修复 一抗 

摘      要：[目的]探究免疫荧光标记小清蛋白(parvalbumin,PV)阳性神经元中ErbB4的最佳实验条件。[方法]小鼠海马组织,PV和ErbB4做免疫荧光染色,通过激光共聚焦观察多聚甲醛后固定时间、抗原修复和一抗孵育时间对PV和ErbB4免疫荧光检测效果的影响。[结果]多聚甲醛后固定不同时间(8 h、48 h和240 h),一抗孵育40 h,结果显示,随着后固定时间的延长,PV和ErbB4的荧光强度和数量逐渐降低(P0.05)。后固定240 h的脑组织,抗原修复后,PV和ErbB4荧光强度和数量显著升高(P0.05)。一抗孵育12 h检测到PV和Erbb4荧光强度明显低于40 h(P0.05),ErbB4阳性神经元的数量低于40 h(P0.05)。[结论]PV阳性神经元中ErbB4的免疫荧光染色的最佳条件是后固定8 h、一抗孵育40 h。对于多聚甲醛后固定较久的组织,抗原修复能够提高其染色效果。