采用蛋白质工程技术将αB-晶状体蛋白导入心肌细胞的初步研究

作     者：蒋磊 刘双 袁灿 肖卫民 王慷慨 尢家騄 肖献忠 JIANG Lei, LIU Shuang, YUAN Can, XIAO Wei Min, WANG Kang Kai,YOU Jia Lu, XIAO Xian Zhong ** (Department of Pathophysiology, Xiang Ya School of Medicine,Central South University, Changsha 410078, China)

作者机构：中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078 

出 版 物：《生物化学与生物物理进展》 (Progress In Biochemistry and Biophysics)

年 卷 期：2002年第29卷第2期

页      面：283-287页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金 ( 39770 30 7) 教育部骨干教师资助计划资助 

主　　题：αB-晶状体蛋白 蛋白质工程 膜移位序列 心肌细胞 心肌损伤 分子机制 

摘      要：为将αB 晶状体蛋白 (αB crystallin ,αB C)导入心肌细胞 ,采用蛋白质工程技术将人αB 晶状体蛋白全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列 (membrane translocatingsequence,MTS)的碱基顺序的下游 ,在大肠杆菌中表达谷胱甘肽 5 转移酶 (GST) MTS αB C融合蛋白 .用谷胱甘肽 Sepharose4B亲和层析分离表达产物 ,用Xa因子将其中GST切除 ,并通过阴离子交换层析纯化MTS αB C .纯化的MTS αB C在SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)上呈单一条带 ,分子质量 2 3ku ;免疫印迹显示GST MTS αB C与MTS αB C均能为人αB C抗体识别而在相应位置出现清晰条带 .GST MTS αB C与MTS αB C均有分子伴侣活性 .用异硫氰荧光素 (FITC)标记的MTS αB C与心肌细胞共培养后 ,在荧光显微镜下观察到其进入了心肌细胞 .