K亚群禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

作     者：袁丽霞 饶明章 张杰 赵子君 陈建 陈杨一骏 严立福 郑晓翠 谢暮晴 曹伟胜 YUAN Li-xia;RAO Ming-zhang;ZHANG Jie;ZHAO Zi-jun;CHEN Jian;CHENYANG Yi-jun;YAN Li-fu;ZHENG Xiao-cui;XIE Mu-qing;CAO Wei-sheng

作者机构：华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广东广州510642 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2017年第47卷第11期

页      面：1349-1356页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31672552) 广东省科技计划项目(2015A020209145) 广东省自然科学基金项目(2016A030313403) 广东省家禽产业技术体系疾病控制岗位专家项目(2016LM1114) 

主　　题：K亚群禽白血病病毒 gp85蛋白 原核表达 间接ELISA 

摘      要：为了研究K亚群禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法,以ALV-K GDFX0603株为模板,扩增其gp85基因,构建原核表达质粒p ET-GDFX0603-gp85,筛选原核表达菌液的诱导条件,采用Ni柱纯化表达的重组蛋白;以纯化后重组蛋白作为包被抗原,研究ALV-K抗体间接ELISA检测方法。结果显示,表达的gp85重组蛋白以包涵体形式存在,大小为53 ku。Western-blot分析表明,该蛋白具有良好的免疫反应性;重复性试验结果显示,板内重复性的CV最大值为10.41%;板间重复性的CV最大值为12.57%,CV值均小于15%。特异性试验结果显示,该方法除了对ALV-A阳性血清有弱的交叉反应外,对ALV-B、ALV-J、AIV、NDV、IBDV、MDV、REV、大肠杆菌和沙门菌的阳性血清均无交叉反应。结果表明,初步建立了检测ALV-K抗体的间接ELISA方法,该方法具有良好的板内和板间重复性及较强的特异性。