***，Zn—SOD融合蛋白的制备

作     者：党莎杰 卫文博 韩丽春 曾文斌 岳惠玉 薛荣亮 Dang Shajie;Wei Wenbo;Han Lichun;Zeng Wenbin;Yue Huiyu;Xue Rongliang

作者机构：陕西省肿瘤医院麻醉科西安市710061 陕西省人民医院骨科西安市710068 西安交通大学第二附属医院麻醉科710004 

出 版 物：《中华麻醉学杂志》 (Chinese Journal of Anesthesilolgy)

年 卷 期：2017年第37卷第8期

页      面：939-942页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：陕西省卫生计生科研基金(2016D040) 

主　　题：tat基因产物 人免疫缺陷病毒 蛋白质结构,三级 超氧化物歧化酶 蛋白质类 

摘      要：目的制备蛋白质转导结构域4-铜锌超氧化物歧化酶（PTD4-Cu，Zn-SOD）融合蛋白。方法分别将pET16b-Cu，Zn-SOD蛋白和pET16b-PTD4-Cu，Zn-SOD重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞*** BL21（DE3）中；加入诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（终浓度0.84 mmol/L）孵育4 h，诱导Cu，Zn-SOD和PTD4-Cu，Zn-SOD融合蛋白表达；经过溶菌酶和超声裂解细菌，取上清液，行15% SDS-PAGE电泳分析目的蛋白的表达情况。利用Ni-NTA His结合树脂在天然条件下纯化获得Cu，Zn-SOD蛋白和PTD4-Cu，Zn-SOD融合蛋白，采用Western blot法鉴定目的蛋白。结果Western blot结果显示目的蛋白纯度为90%，可见分子量约为19 kDa的Cu，Zn-SOD蛋白条带和分子量约为20 kDa的PTD4-Cu，Zn-SOD融合蛋白条带。结论成功制备了PTD4-Cu，Zn-SOD融合蛋白。