牛IgG Fc片段与FnBPB-ClfA串联表达及其对金黄色葡萄菌性奶牛乳腺炎的免疫效果

作     者：崔健 郝永清 赵红梅 杜琳 李松建 CUI JIan HAO Yong-qing ZHAO Hong-mei DU Lin LI Song-jian

作者机构：内蒙古农业大学兽医学院微生物学与免疫学实验室内蒙古呼和浩特010018 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2017年第38卷第10期

页      面：27-32页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31460664) 农牧交错区生态型现代奶业生产模式研究与示范项目(2012BAD12B09-02) 

主　　题：金黄色葡萄球菌 奶牛IgG Fc 重组蛋白Fc—FnBPB—ClfA 

摘      要：为了提高金黄色葡萄球菌(***)黏附素FnBPB-ClfA基因表达蛋白对奶牛的免疫效力,应用RT-PCR扩增奶牛IgG Fc基因片段与构建的金黄色葡萄球菌(***)FnBPB-ClfA黏附素基因串联构建质粒pMD19T-Fc-FnBPB-ClfA,并通过双酶切将其克隆于pET32a(+),以构建质粒pET32a-Fc-FnBPB-ClfA并进行诱导表达。以盐酸左旋咪唑(LH)或氢氧化铝(ALUM)为佐剂,与纯化的重组蛋白(bFcFnBPB-ClfA)混合以首次免疫肌肉注射,加强免疫乳头管灌注或首次免疫、二次免疫及三次免疫均以肌肉注射方式免疫临近干奶期的奶牛。用间接ELISA和Western blot对各组牛血清中的抗体进行监测,评价免疫效果。结果显示,以LH为佐剂免疫的(A组)牛21d时抗体水平最高,可达到1∶1 600;而以ALUM为佐剂免疫的B组和C组抗体水平分别为1∶800和1∶400。IgG水平动态监测结果表明,以LH为佐剂免疫牛的血清中特异性抗体上升趋势明显高于其他免疫组。研究结果表明,以首次免疫肌肉注射,加强免疫乳头管灌注的方式较好,并且bFc-FnBPB-ClfA与LH佐剂混合后免疫奶牛能最有效激发奶牛免疫反应。