人miR-1908慢病毒载体构建及在人脂肪前体细胞中的表达验证

作     者：杨蕾 季晨博 史春梅 陈玲 庞玲霞 夏黎 郭锡熔 倪毓辉 

作者机构：南京医科大学儿科研究所江苏南京210029 南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科江苏南京210004 

出 版 物：《中国儿童保健杂志》 (Chinese Journal of Child Health Care)

年 卷 期：2014年第22卷第10期

页      面：1018-1021页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家自然科学基金(81100618) 江苏省自然科学基金(BK2011107) 南京市科技发展计划(201104013) 

主　　题：miR-1908 慢病毒 人脂肪前体细胞 

摘      要：目的构建人miR-1908慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪前体细胞中过表达效果。方法以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-1908区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36h开始观察荧光标记,72h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-1908的相应表达量。结果成功构建人miR-1908慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪前体细胞的效率可达到70%以上,miR-1908过表达水平可接近2倍。结论本研究成功构建了人miR-1908慢病毒过表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪前体细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础。