β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞通透性升高中的作用

作     者：袁清红 颜学滔 郑菲 王轶芃 张宗泽 陈凯 王焱林 詹佳 Yuan Qinghong;Yan Xuetao;Zheng Fei;Wang Yipeng;Zhang Zongze;Chen Kai;Wang Yanlin;Zhan Jia

作者机构：武汉大学中南医院麻醉科430071 广东省深圳市宝安区妇幼保健院麻醉科518133 

出 版 物：《中华麻醉学杂志》 (Chinese Journal of Anesthesiology)

年 卷 期：2017年第37卷第7期

页      面：869-873页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100217[医学-麻醉学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年基金(81101408) 武汉市科技局晨光计划项目(2016070204010150) 

主　　题：抑制蛋白类 胆碱能拮抗剂 内毒素类 肺 毛细血管通透性 

摘      要：目的 评价β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞通透性升高中的作用.方法 人肺微血管内皮细胞以1×10^5个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）或培养瓶（4ml/瓶）中,采用随机数字表法分为5组（n=15）：空质粒转染组（C组）、LPS＋空质粒转染组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋LPS＋空质粒转染组（P＋LPS组）、LPS＋β-抑制蛋白-1 shRNA转染组（LPS＋ shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋LPS＋β-抑制蛋白-1 shRNA转染组（P＋LPS＋shRNA组）.LPS组和LPS＋shRNA组分别以空质粒1.5 μg或含15 nmol/L β-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞,孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h;P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组分别以空质粒1.5 μg或含15 nmol/L β-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞,孵育24 h时加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1h.采用Transwell法测定细胞通透性,采用免疫荧光化学法检测热休克蛋白27（HSP27）的表达水平,采用Western blot法检测β-抑制蛋白-1、丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK （p-p38MAPK）的表达水平,并计算p-p38MAPK/p38MAPK比值.结果 与C组比较,LPS组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组细胞通透性升高,HSP27表达上调,p-p38MAPK/p38MAPK比值升高,β-抑制蛋白-1表达下调（P〈0.05）,P＋LPS组上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）;与LPS组比较,P＋LPS组细胞通透性降低,HSP27表达下调,p-p38MAPK/p38MAPK比值降低,β-抑制蛋白-1表达上调,P＋LPS＋shRNA组p-p38MAPK/p38MAPK比值升高（P〈0.05）,其余指标差异无统计学意义（P〉0.05）;与P＋LPS组比较,P＋LPS＋shRNA组细胞通透性升高,HSP27表达上调,p-p38MAPK/p38MAPK比值升高,β-抑制蛋白-1表达下调（P〈0.05）.结论 盐酸戊乙奎醚抑制LPS导致的人肺微血管内皮细胞通透性升高的机制完全与β-抑制蛋白-1有关.