Burkholderia cepacia胆固醇酯酶及其分子伴侣基因的串联表达及酶学性质的研究

作     者：张亚慧 张玲 沈微 辛瑜 杨海麟 ZHANG Yahui;ZHANG Ling;SHEN Wei;XIN Yu;YANG Hailin

作者机构：江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 

出 版 物：《工业微生物》 (Industrial Microbiology)

年 卷 期：2017年第47卷第4期

页      面：30-36页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：基金项目:江苏省优青(BK20160053) 江苏省产学研(BY2016022-40) 

主　　题：胆固醇酯酶 Burkholderia cepacia 分子伴侣 串联表达 

摘      要：为实现胆固醇酯酶的可溶性表达,以Burkholderia cepacia ST-200胆固醇酯酶为研究对象,将酶及其分子伴侣通过人工添加的SD序列在大肠杆菌中进行串联表达。通过SDS-PAGE电泳分析,胆固醇酯酶成功获得可溶性表达,摇瓶水平的总酶量为1 077 U/L。经过镍柱纯化之后可以获得一条相对分子量约为37 kDa的单一条带。利用圆二色谱解析胆固醇酯酶的二级结构,并测定Tm值,从最适温度、最适pH、热稳定性、pH稳定性及有机溶剂耐受性等方面对胆固醇酯酶进行研究,结果表明该酶在pH为7.0,45℃条件下表现出最大活力。